RESUMO
Agrocybe cylindracea is a common source of active polysaccharides, but their fine structures are not clearly elucidated. In the present study, four fractions were purified from the alkaline extract of A. cylindracea (JACP), and their chemical components and structures were compared by HPAEC-PAD, methylation combined with GC-MS, and 1D/2D NMR analysis. Results showed the purified fractions' physicochemical properties, including monosaccharide compositions, molecular weights, viscosities and surface morphology considerably varied. JACP-30 was identified as a fucoglucogalactan with a α-(1 â 6)-galactopyranosyl as main chain. JACP-50p and JACP-80r were characterized as ß-(1 â 6)-glucans with side chains composed of terminal and 3-substituted ß-glucopyranosyl residues attached at O-3 for every three residues. Similarly, the backbone of JACP-80 was ß-(1 â 6)-linked glucopyranosyl and ß-(1 â 3,6)-linked glucopyranosyl residues at a ratio of 4:1. This work provides more information to the understanding of polysaccharides from A. cylindracea, further guiding its biological researches and developing the application in food and biomedicine industries.
Assuntos
Agrocybe/química , Polissacarídeos Fúngicos/química , Extração Líquido-Líquido/métodos , Monossacarídeos/química , beta-Glucanas/química , Sequência de Carboidratos , Polissacarídeos Fúngicos/classificação , Polissacarídeos Fúngicos/isolamento & purificação , Humanos , Metilação , Peso Molecular , Monossacarídeos/classificação , Monossacarídeos/isolamento & purificação , Hidróxido de Sódio/química , beta-Glucanas/classificação , beta-Glucanas/isolamento & purificaçãoRESUMO
Beta-1,3-glucanases estão envolvidas na digestão de insetos que utilizam como fonte nutricional detritos ou plantas. Nesse trabalho, nós investigamos o papel dos genes da família 16 das glicosídeo hidrolases (GHF 16) em larvas de Ae. aegypti e sua possível participação na digestão de leveduras. O genoma de Ae. aegypti contém seis genes (Aae GH16.1 Aae GH16.6) que codificam para proteínas da família GH16, contendo de 2 a 6 éxons. Análises filogenéticas sugerem que em Nematoceros ocorreram duplicações em alguns genes que contêm a região catalítica conservada nessa família de proteínas (Aae GH16. 1, 2, 3, 5, 6)> Essas proteínas são similares a outras proteínas de insetos com atividades glucanásicas. A proteína Aae GH16. 4 parece estar relacionada a proteínas ligantes de beta-1,3-glucana, não possuindo os resíduos catalíticos conservados e peptídeo sinal. Beta-1,3-glucanases e proteínas ligantes de beta-glucana são proteínas homólogas e parecem ter sido originadas a partir do mesmo gene ancestral, antes da diversificação dos holometábolos. Larvas de Ae. aegypt possuem atividades de beta-1,3-glucanases na cabeça, tubo digestivo e resto do corpo. As atividades encontradas no tubo digestivo não foram atribuídas à dieta das larvas. Essas atividades possuem uma faixa de pH ótimo entre 5-9 e massas moleculares de 41 kDa a 150kDa. Larvas de Ae. aegypt se desenvolvem a partir da eclosão dos ovos até a fase adulta em uma dieta exclusiva contendo leveduras Ustilago sp (vivas ou autoclavadas), porém esta condição não provocou uma indução das atividades de beta-1,3-glucanasesO homogenato do tubo digestivo das larvas parece lisar a parede das leveduras após 4 h de incubação. Todos os genes da família GH16 foram expressos em todos os tecidos e apresentaram diferentes padrões de expressão. Larvas silenciadas para os genes AeGH 16.5 da GHF 16 apresentaram fenótipos de curvas de sobrevivência e taxas de pupação inferiores aos controles...
Sob condições de estresse, o fenótipo observado nas larvas se agrava consideravelmente, principalmente nos genes AeGH16.1 e AeGH16.6. Nos experimentos de ensaios enzimáticos de beta-1,3-glucanases, insetos silenciados para o gene AeGH16. 5 apresentaram uma atividade muito inferior comparados aos silenciados para AeGH16.6 ou aos grupos controles (GFP e água) em amostras de tubo digestivo. Ensaios nesses grupos utilizando o resto do corpo não sofreram alterações. O perfil cromatográfico do tubo digestivo também foi analisado, e novamente insetos silenciados para AeGH16.5 apresentaram um pico de atividade menor que os demais, sugerindo que esse gene codifica a beta-1,3-glucanase intestinal em larvas de Ae. aegypt...
Assuntos
Aedes , Digestão , Insetos/metabolismo , beta-Glucanas/classificação , Dengue , Febre AmarelaRESUMO
Antecedentes. El β-(1,3)(1,6)-D-glucano es un compuesto de la pared celular de los hongos que presenta efectos inmunomoduladores y anticancerígenos. La (1,3)-β-glucano sintasa es una de las principales enzimas involucradas en su síntesis. Objetivos. Diseñar cebadores para amplificar y caracterizar parcialmente el gen correspondiente a la enzima (1,3)-β-glucano sintasa y probarlos en la cepa CP-132 de Ganoderma lucidum. Métodos. Los cebadores fueron diseñados realizando una búsqueda de la secuencia del gen en otros hongos. Después, con la técnica de PCR se probaron los cebadores utilizando ADN extraído de la cepa CP-382 de G. lucidum. Las secuencias obtenidas se compararon con aquellas de la base de datos del GenBank. Resultados. Se diseñaron 3 pares de cebadores. Todos los pares amplificaron productos de PCR de tamaño esperado. Las secuencias amplificadas con los pares BGS2113UmF y BGS3097UmR, y BGS547UmF y BGS2113UmR correspondieron a un par de secciones del gen de la (1,3)-β-glucano sintasa. Las secuencias deducidas de aminoácidos mostraron una similitud alta con genes homólogos de otros hongos, especialmente con aquellos de la clase Agaricomycetes. Conclusiones. El diseño de cebadores para amplificar parcialmente el gen de la (1,3)-β-glucano sintasa a partir de secuencias de genes homólogos fue exitoso. Estos cebadores permitirán en un futuro la caracterización de esta importante enzima en un amplio grupo de hongos (AU)
Assuntos
Ganoderma/enzimologia , Ganoderma/isolamento & purificação , Ganoderma/patogenicidade , Peso Molecular , Reação em Cadeia da Polimerase/instrumentação , Reação em Cadeia da Polimerase/normas , Reação em Cadeia da Polimerase , Ganoderma , Glucanos , Glucanos/síntese química , beta-Glucanas/classificação , beta-GlucanasRESUMO
BACKGROUND AND AIMS: Horsetails (Equisetopsida) diverged from other extant eusporangiate monilophytes in the Upper Palaeozoic. They are the only monilophytes known to contain the hemicellulose mixed-linkage (1 â 3, 1 â 4)-ß-d-glucan (MLG), whereas all land plants possess xyloglucan. It has been reported that changes in cell-wall chemistry often accompanied major evolutionary steps. We explored changes in hemicelluloses occurring during Equisetum evolution. METHODS: Hemicellulose from numerous monilophytes was treated with lichenase and xyloglucan endoglucanase. Lichenase digests MLG to di-, tri- and tetrasaccharide repeat-units, resolvable by thin-layer chromatography. KEY RESULTS: Among monilophytes, MLG was confined to horsetails. Our analyses support a basal trichotomy of extant horsetails: MLG was more abundant in subgenus Equisetum than in subgenus Hippochaete, and uniquely the sister group E. bogotense yielded almost solely the tetrasaccharide repeat-unit (G4G4G3G). Other species also gave the disaccharide, whereas the trisaccharide was consistently very scarce. Tetrasaccharide : disaccharide ratios varied interspecifically, but with no consistent difference between subgenera. Xyloglucan was scarce in Psilotum and subgenus Equisetum, but abundant in subgenus Hippochaete and in the eusporangiate ferns Marattia and Angiopteris; leptosporangiate ferns varied widely. All monilophytes shared a core pattern of xyloglucan repeat-units, major XEG products co-chromatographing on thin-layer chromatography with non-fucosylated hepta-, octa- and nonasaccharides and fucose-containing nona- and decasaccharides. CONCLUSIONS: G4G4G3G is the ancestral repeat-unit of horsetail MLG. Horsetail evolution was accompanied by quantitative and qualitative modification of MLG; variation within subgenus Hippochaete suggests that the structure and biosynthesis of MLG is evolutionarily plastic. Xyloglucan quantity correlates negatively with abundance of other hemicelluloses; but qualitatively, all monilophyte xyloglucans conform to a core pattern of repeat-unit sizes.
